皮膚反應（致敏）試驗儀
 

　　一、 儀器介紹
 

　　實驗目的：
 

　　確定重復接觸受試物對哺乳動物是否可引起皮膚反應及其程度
 

　　試驗概述：
 

　　局部封閉涂皮試驗(Buehler test，BT)和豚鼠最大值試驗(uinea pig maximisation test，GPMT)是實驗動物通過多次皮膚涂抹(誘導接觸)或皮內(nèi)注射受試物10d~14d(誘導階段)后,給予激發(fā)劑量的受試物,觀察實驗動物,并與對照動物比較對激發(fā)接觸受試物的皮膚反應強度。
 

　　小鼠局部淋巴結(jié)分析試驗(locallymph node assay，LLNA)是通過耳部給予實驗動物受試物,引起淋巴結(jié)的淋巴細胞增生,淋巴細胞增生與受試物劑量(過敏程度)成比例。利用放射性標記方法,測定試驗組與對照組淋巴細胞的標記率,并進行對比,獲得刺激指數(shù),評價致敏強度。應用范圍
 

　　應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域
 

　　二、試驗步驟:
 

　　1. Buehler Test（BT）
 

　　動物模型:豚鼠
 

　　操作步驟:
 

　　誘導階段:通過封閉式皮膚涂抹受試物，持續(xù)10-14天。激發(fā)階段:間隔后再次涂抹受試物，觀察皮膚反應。
 

　　觀察指標:紅斑、水腫等皮膚炎癥反應的強度(主觀評分)
 

　　優(yōu)點:
 

　　模擬人類皮膚接觸途徑，適用于局部制劑(如化妝品、外用藥物)
 

　　無需注射，操作相對溫和。
 

　　缺點:
 

　　敏感性較低，可能漏檢弱致敏物，依賴主觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳統(tǒng)化妝品、外用藥品的安全性評估。
 

　　2.豚鼠最大值試驗（GPMT）
 

　　動物模型:豚鼠
 

　　操作步驟:
 

　　誘導階段:皮內(nèi)注射受試物(常聯(lián)合弗氏佐劑)結(jié)合皮膚涂抹，持續(xù)10-14天。
 

　　激發(fā)階段:再次涂抹受試物，評估皮膚反應。
 

　　觀察指標:與BT類似，但反應更強烈(紅斑、水腫、硬結(jié))
 

　　優(yōu)點:
 

　　敏感性高，可檢測強致敏物和弱致敏物;
 

　　國際的“金標準”，尤其適用于化學品和工業(yè)原料。
 

　　缺點:
 

　　使用佐劑可能引發(fā)過度免疫反應，導致假陽性;
 

　　動物痛苦程度較高，倫理爭議較大。
 

　　應用場景:工業(yè)化學品、強致敏性物質(zhì)(如染發(fā)劑、橡膠添加劑)的嚴格檢測。
 

　　3.小鼠局部淋巴結(jié)試驗（LLNA）
 

　　動物模型:小鼠.
 

　　操作步驟:
 

　　誘導階段:連續(xù)3天耳部涂抹受試物。
 

　　檢測指標:通過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺激指數(shù)(SI)觀察指標:淋巴結(jié)淋巴細胞增殖程度(SI>3判為陽性)
 

　　優(yōu)點:
 

　　客觀定量:減少主觀評分誤差；
 

　　符合3R原則:動物用量少，無需激發(fā)階段，痛苦小;
 

　　高效快速:試驗周期短(約1周)。
 

　　缺點:
 

　　對某些物質(zhì)(如金屬鹽)敏感性不足，需使用放射性物質(zhì)或特殊設備，成本較高。
 

　　應用場景:歐盟等法規(guī)優(yōu)先推薦的替代方法，廣泛用于藥品、化妝品及化工產(chǎn)品的初篩。